改良Lowry法蛋白定量試劑盒文章資料

改良Lowry法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品簡介：

目上常用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCAProteinAssayKit)和Bradford蛋白定量試劑盒(BradfordProteinAssayKit)。改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色比色物，用分光光度法(酶標(biāo)儀或分光光度計)檢測750nm處吸光度，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求得待測蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

組成：

根據(jù)樣品數(shù)量按照試劑(A):Folin-CiocalteuReagent：ddH2O=1:1的比例配制工作液現(xiàn)配現(xiàn)用

儲存條件：

12個月有效。

改良Lowry法蛋白定量試劑盒 操作步驟（僅供參考）：

1、取適量10mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取150μl 10mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入850μl稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

2、根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1的比例配制改良LowryReagent工作液，充分混勻。

3、將1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)用稀釋待測樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為300μg/ml、60μg/ml、12.5μg/ml、2.5μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔。

4、加待測蛋白樣品或稀釋液(空白對照)到96孔板的樣品孔中，如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。

5、用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良LowryReagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻。室溫準(zhǔn)確孵育。

6、用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動輕輕混勻30s。

7、輕輕混勻96孔板，酶標(biāo)儀或微量滴定板讀數(shù)儀測定750nm處吸光度，也可用分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積，檢測樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。

注意事項：

1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃保存。

2、待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。

3、如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測體積。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5、本產(chǎn)品僅供科研使用，嚴(yán)禁它用。

     標(biāo)簽：蛋白定量試劑盒 試劑盒 本生試劑盒 試劑A

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