動物細(xì)胞培養(yǎng)中動物血清的作用

　　①提供細(xì)胞生存和增殖所必需的生長調(diào)節(jié)因子。

　　②補(bǔ)充基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量不足的營養(yǎng)成分。

　　③含有一些可供貼壁細(xì)胞型細(xì)胞貼壁生長的基質(zhì)成分。

　　④提供載體蛋白，可結(jié)合維生素、脂質(zhì)、金屬離子等。

　　⑤在一些情況下，中和毒性物質(zhì)保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

　　⑥給培養(yǎng)液提供良好的緩沖系統(tǒng)。

　　⑦提供蛋白酶抑制劑，保護(hù)細(xì)胞免受死細(xì)胞釋放的蛋白酶的傷害。

　　但是血清也存在一些弊端，比如存在不少有害成分（補(bǔ)體、免疫球蛋白和一些生長抑制因子等）；血清成分不明確，影響對結(jié)果的分析；不同動物、不同批次的血清成分和活性有很大不同，使得培養(yǎng)結(jié)果不穩(wěn)定。

　　盡管如此，血清仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長狀態(tài)不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長旺盛后再換成無血清培養(yǎng)液。

　　血清中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白質(zhì)主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，其中有些氨基酸動物細(xì)胞本身不能合成（稱為必需氨基酸），必須由培養(yǎng)液提供。血清激素有胰島素、生長激素等及多種生長因子（如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、類胰島素生長因子等）；血清還含有多種未知的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其他活性物質(zhì)，能促進(jìn)細(xì)胞的生長、增殖和貼附。因此，細(xì)胞培養(yǎng)時，要保證細(xì)胞能夠順利生長和增殖，一般需添加10%～20%的血清，動物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用.

　　動物血清保存的注意事項(xiàng)：

　　一、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.

　　二、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分（complement）滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃斐裳宄恋砦镲@著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.

　　三、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.

　　四、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.

　　五、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清.

　　六、切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量.